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胰蛋白酶edta存储

发布时间: 2022-05-30 15:01:50

1. EDTA加入胰酶消化细胞的具体作用是什么

细胞之间是通过CAM(细胞粘性分子)相连的,而很多粘性分子只有在有+2价金属离子,如Ca2+,Mg2+,的存在下才能行使这种功能.在胰酶中加EDTA的作用是熬合这些二价离子,使细胞被消化成单细胞形态

2. 可以用含edta的胰蛋白酶做流式和细胞凋亡吗

看你要做的是什么检测。如果是细胞表面标记,尽量不要使用胰酶消化,否则可能破坏表面的分子构象,导致假阴性。这类情况可以使用弹性酶,胶原酶等来短时间消化,或者单独使用EDTA。

3. 胰酶加EDTA怎么终止消化如果弃液的话,消化液里的细胞不就没了

胰酶切割细胞外基质的一些负责粘连和附着的蛋白,而EDTA通过螯合Ca离子,比较胰酶的活性,EDTA的作用更加温和。有的人在胰酶里添加一些EDTA,或者对付特别难消化的细胞,添加多一些EDTA,如果胰酶中加有EDTA,就要离心,细胞就不会浪费掉。河南省干细胞库为您解答,希望能解决您的疑问。

4. 含EDTA的胰酶消化液包装上写着4度保存,但是我不小心放-20度了,再放回4度还能用吗,60块一瓶呢舍不得丢

低温不会破坏酶的活性的,没事的。

5. 胰蛋白酶为什么不能在碱性溶液里保存

酶是蛋白质,碱性条件下会水解

6. 25%胰蛋白酶和胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)的区别

EDTA是乙二胺四乙酸,一种金属螯合剂。一般和胰蛋白酶配合使用。原因在于,钙,镁等金属离子会降低胰酶活力,故在使用胰酶消化液时要配合加入EDTA。它可以螯合这些离子,消除对胰酶的抑制。

7. 求生化试剂中用于细胞培养的胰蛋白酶EDTA消化液的使用方法。

1.
贴壁细胞的消化:
a)
吸去培养液,用无菌的
PBS、Hanks
液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
b)
加入少量胰蛋白酶-EDTA
消化液,盖过细胞即可,室温放置
1-2
分钟。不同的细胞消化时间有所不同,对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。
c)
显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
d)
如果发现消化不足,可加入胰蛋白酶-EDTA
消化液重新消化。
e)
如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g
离心
1
分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2.
组织的消化:
不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
可以看看索莱宝的胰蛋白酶EDTA消化液。

8. 细胞培养用胰蛋白酶溶液如何配制与消毒

博凌科为生物科技-为你解答:胰蛋白酶溶液的配制与消毒:胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰 酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH为8.0、温度为37℃时,胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时,应把握 好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、 Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks 液。终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。1. 称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度为0.25%,用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水(若用双蒸水需要调PH到7.2左右)或PBS(D- hanks)液中。搅拌混匀,置于4℃内过夜。2. 用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器(0.22微米微孔滤膜)抽滤除菌。然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。

9. 请问人巨噬细胞的消化是用胰蛋白酶+EDTA,还是只用EDTA

你好!我认为您应该搞清楚胰蛋白酶和EDTA在消化过程中的作用。
消化的目的是去除细胞之间的连接,细胞之间会有蛋白类细胞外基质存在,从而使细胞之间相互连接在一起及一些蛋白类细胞外基质具有粘附作用,从而贴壁。胰蛋白酶就是作用于赖氨酸和精氨酸羧基断肽键,从而起到消化目的。
一些组织中需要Ca2+等起到维持组织完整性,而EDTA也就是乙二胺四乙酸可以与Ca2+结合,从而去除钙离子,使细胞分散。其作用比胰蛋白酶缓和。使用浓度为0.02%,以无钙、镁的平衡盐溶液配制。
实验室内常将胰蛋白酶和EDTA联合使用。可提高消化效率,细胞分散情况改善。
EDTA不能被血清抑制,所以消化后必须彻底清洗。EDTA对成纤维细胞作用差。
结合上面所述,你就可以进行判断!