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细胞可在负八十存储多久

发布时间: 2022-07-29 00:29:41

❶ 感受态细胞为何放置于负八十冰箱保存

感受态细胞(competent cell):理化方法诱导细胞,吸收周围环境中的DNA分子,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。 主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大,直观的说,使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性,这种孔洞会被细胞自身所修复。

主要原理
通过处理使细胞的通透性变大

性质
活细胞

制作方法
CaCl2法
1.将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞

细胞壁通透性发生变化,极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基-磷酸钙复合物。

联合其它的二价金属离子(如Mn、Co)、DMSO或还原剂等物质处理细菌,则可使转化率提高100~1000倍。

2.此时,将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激(90s),细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动,并随机出现许多间隙,外源DNA就可能被细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达,实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。

3.将转化后的细胞在选择性培养基上培养,筛选出带有外源DNA分子的阳性克隆。

❷ 细胞冻存可以一直放在-80℃吗

会有些影响,在活率方面.70%的细胞应该没问题.
1)传统方法: 冻存管置于4℃ 40min--->-20℃ 30min--->-80℃ 16~18h
(或隔夜)--->液氮中长期储存.
注意:-20℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些.
(2)程序降温:利用已设定程序的程序降温仪以-1~-3℃/min的速度由室温降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮中长期储存.

❸ 负八十度保存菌种 要多久能解冻

10小时左右。负八十度保存菌种拿出来之后放到常温的场所10小时即可解冻。

❹ 细胞从负一百五移到负八十可保存多久

可以保存几年的
加入80%的甘油混匀后冻存能保存几年,这是常见的保菌的方法。

❺ 质粒可以放到负八十吗

质粒可以在零下80度的环境下保存。

把携带质粒的菌种保存于20%的甘油于-80度可长期保存几年,而仅保存质粒零下20度避免反复冻融就可以长期保存了。

质粒的分类:

1、根据质粒能否通过细菌的接合作用,可分为接合性质粒和非接合性质粒。接合性质粒带有与接合传递有关的基因。非接合质粒在一定条件下通过与其共存的接合质粒的诱动或转导而传递。

2、根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类:严紧控制型和松弛控制型。严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用,只能在细胞周期的一定阶段进行复制,当细胞染色体停止复制时,质粒也就不再复制。松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响,在整个细胞生长周期中随时都可以复制,在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。

3、根据质粒的不相容性,可分为不相容性和相容性。不相容性指结构相似、密切相关的质粒不能稳定地共存于同一宿主细菌内的现象,反之为相容性。常用于流行病学的调查。

以上内容参考:网络-质粒

❻ 细胞在负80冰箱能放多久

一般冻存盒中加入甘油的居多吧。丙二醇,异丙醇加入后,一方面防止由于溶液效应而使细胞脱水及蛋白质变性;另一方面在稍低于溶液冰点时人工强行诱导结冰,以免出现溶液过冷现象,防止结冰时释放潜热引起温度回升,以及形成大的冰晶,减轻对细胞的损伤。在一步冷冻中.选用高浓度的渗透性保护剂组成的玻璃化溶液,在冷冻过程中,不发生结晶而形成玻璃样固体,维持液态时的正常分子与离子分布,使细胞内发生玻璃化而起到保护作用