❶ 色谱柱烧坏了会出现什么情况
涂层被破坏导致保留时间变化,峰的分离度变得不好,以前能分开的峰再也分不开了。 严重时也有可能出现不出峰的情况
❷ 色谱柱常见的故障以及日常维护工作有哪些
在我们日常工作中,经常会发现色谱柱出现柱压过高的现象,这有可能是因为微粒堵塞,细菌生长造成的,也有可能是因为在线过滤器不干净,压力传感器不准确等都会造成柱压过高的后果,除了柱压的问题,同时柱效低也是经常使大家苦恼的问题,这有可能是色谱柱被污染、过滤片部分堵塞、色谱柱内的死体积造成的,还有一种在我们工作里经常出现的就是重复性差、不出峰、回收率低,那么这是什么原因造成的呢?当梯度实验时平衡时间不足时,温度波动,流动相组成改变,样品溶剂不同,样品稳定性不好,方法的开发不好,缓冲液的酸碱度不合适或者缓冲能力不足,为了以后再工作中减少仪器的故障,首先一定要做到仪器的日常维护问题。搜科网总结一下四点:
1、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动,首先一定要避免温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下,同时在调节流速时应该缓慢进行。
2、经常用强溶剂冲洗色谱柱,清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右,即常规分析需要50~75ml。
3、选择使用适宜的流动相(尤其是pH),以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
4、应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然。
❸ 有机柱色谱实验中,色谱柱中若留有空气或填装不均匀,对分离效果有何影响如何避免
会影响渗透速率和显色的均匀
避免
1,装柱过程中应不断敲打色谱柱。
2,过程中,柱内洗脱剂的液面高度始终不能低于吸附剂最上端。
❹ 色谱柱接反了用有什么影响高效液相色谱分析中,分析色谱柱接反了用对柱子有什么影响
如果色谱柱使用时间不长,关系就不大。 但如果是长时间使用过的色谱柱,会导致柱效下降。基线不稳,但冲洗一段时间就好了。 其他的到影响不大。
❺ 柱色谱实验中,若装柱时,柱中有气泡或填装不均匀,对分离效果有什么影响
会造成拖尾现象,实际上就是各种物质分离区间互相重叠,分离效果变差。
❻ 液相色谱的柱子接反了对样品有影响吗
柱子质量比较好,理论上没有影响,如果柱子质量不好,可能会导致分离度下降、柱效降低。一般说来色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
一般液相色谱柱是有方向的,通常情况下只能按照其规定流向通过流动相,尤其当色谱柱填充质量不高的时候。
比如实验室自制色谱柱、使用压力超高的色谱柱等。这类色谱柱的进口端一般会有一定的凹陷,如果反过来使用,会导致色谱柱填料的塌陷,产生柱效降低等后果。
但是如果制备良好的色谱柱,比如热电的色谱柱,在进了比较脏的样品后,可以反冲洗来冲出杂质。
(6)色谱柱配置错误会出现什么情况扩展阅读
色谱柱的流动相
1、在进行样品检测前,至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。
2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱,以免柱性能损坏(添加5%的有机溶剂冲洗色谱柱,同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡)。
3、流动相需脱气后使用,可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别,应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
❼ 色谱柱的注意事项
色谱柱 的正确使用和维护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。
①避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓(如前所述)。
②应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然。
③一般说来色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
④选择使用适宜的流动相(尤其是pH),以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
⑤避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内,需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
⑥经常用强溶剂冲洗色谱柱,清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右,即常规分析需要50~75ml。
下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及顺序,作为参考:硅胶柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次冲洗,然后再以相反顺序依次冲洗,所有溶剂都必须严格脱水。甲醇能洗去残留的强极性杂质,已烷使硅胶表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次冲洗,再以相反顺序依次冲洗。如果下一步分析用的流动相不含缓冲液,那么可以省略最后用水冲洗这一步。一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质,在甲醇(乙腈)冲洗时重复注射100~200μl四氢呋喃数次有助于除去强疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脱能除去蛋白质污染。
阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗,阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗,除去交换性能强的盐,然后用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有机物)、甲醇、水依次冲洗。
⑦保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
⑧色谱柱使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内,使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷,死体积增大。
在后两种情况发生时,小心拧开柱接头,用洁净小钢将柱头填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取净)再把柱内填料整平。然后用适当溶剂湿润的固定相(与柱内相同)填满色谱柱,压平,再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善,但是很难恢复到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前装一根与分析柱相同固定相的短柱(5~30mm),可以起到保护、延长柱寿命的作用。采用保护柱会损失一定的柱效,这是值得的。
通常色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料,只能在pH2~9范围内使用。柱子使用一段时间后,可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶,特别是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷,使柱效下降,这时也可补加填料使柱效恢复。
每次工作完后,最好用洗脱能力强的洗脱液冲洗,例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时,使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素(氟、氯、溴)的化合物可能会腐蚀不锈钢管道,不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子如不经常使用,应每隔4~5天开机冲洗15分钟。
❽ 3420A气相色谱仪 色谱柱的故障有哪些
你指的是北分的仪器吧,具体的故障要看你配置的检测器和什么色谱柱。
如果你用的是毛细柱,一般柱子没有什么问题,如是填充柱要注意填充单体的均匀性和固定相的流失。色谱柱一般都不是仪器商制造的,基本都是代理做的。无论哪种色谱柱,日常需要注意的要不能漏气和升温不能超过最高使用温度。
3420A应该是阀控制流量,每次调节完要注意阀的旋转位置,建议自己用笔做个记号,阀调好后最好不要动,建议对这些国产的色谱最好单机单用,固定做一个项目,因为国产仪器的阀的故障率是比较高的。
检测器估计你用的是FID,一般也不宜出故障。注意点火时不要把灰和脏东西弄进去,使用时间长了,注意清洗等等。
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❾ 柱色谱法中装柱不均匀或者有气泡、裂缝将会造成什么后果,为什么
气泡或者裂缝会造成谱带之间的界限倾斜、模糊。尤其是裂缝引起的填料断层会造成沟流,使得组分之间混合,严重影响分离效果。装柱不均匀会降低柱子的分离效率:填料太松散,流动相速度太快,组分没有在两相之间充分达到吸附溶解平衡,降低会塔板数,分离不完全;太紧密不仅流动相过柱速度慢,也会造成组分在固定相中扩散,使得谱带加宽,甚至重叠。
❿ 色谱柱中有空气或填装不均匀对分离效果有何影响如何避免
对于气相色谱和液相色谱分别而言,色谱柱中有空气对他们的影响不一样,如果是液相色谱,如果有空气,会造成基线波动及噪声,对分析结果有影响,你需要排除空气。
但对于气相色谱,有空气,对分析影响不大。如果色谱柱没有装填好,只要空间不是很大,你可以忽略。
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