‘壹’ 生物酵母菌培养实验数酵母菌的时候有哪些注意事项具体步骤
一、实验目的
1、学会测微尺和血球计数板的使用方法。
2、建立对微生物大小的概念。
二、实验材料
1、显微镜、物镜测微尺、目镜测微尺、血球计数 板、载玻片等。
2、麦芽汁培养基、酵母菌。
3、吸管、吸水纸等。
三、实验原理
(一)酵母菌大小的测定原理
所有微生物的大小需要用刻有一定刻度的测微尺来测量，先用绝对长度的物镜测微尺来校正不表示绝对长度的目镜测微尺，计算后者每格所代表的实际长度，然后放上待测的标本，用目镜测微尺测定标本上微生物细胞占目镜测微尺的格数，就可计算该微生物的大小。酵母菌的直径约8-10μm。
(二)酵母细胞计数原理
微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内。后者是在乎板上长成菌落后再计数，反应较真实，但费时太长。本实验是利用血球计数板进行直接计数。计数前需对样品做适当稀释，按照规定方法及计算公式运算后，即可得出实际数值。
四、操作方法
(一)酵母菌大小测定的操作方法
1.测微尺的构造和使用方法
(1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片，其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50格，实际每格等于100μm。刻度的大小是随使用的接目镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用物镜测微尺来标定，如图。
(2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将长1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm，如图。
2.目镜测微尺的标定
(1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下，再旋上目透镜，并装入镜筒内。
(2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆圈位于视野中央。
(3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。如图
(4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。
3.计算方式 (1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数×10／两个重叠刻度间目镜测微尺格数
(2)以同样方法，分别在不同倍率的物镜下测定测微尺上每格的实际长度。
目镜测微尺( )格=物镜测微尺( )格
目镜测微尺每格=( )
(3)如此测定后的目镜测微尺的尺度，仅适用于测定时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数。若更换物镜、目镜的放大倍数时，必须再进行校正标定。
4.酵母菌大小的测定
(1)取下物镜测微尺，换上酵母菌水浸制片。
(2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格，然后换算出菌体的实际长度。
(3)在同一标本上测定5-10个菌体，求其平均值。
(二)酵母细胞数的测定操作方法
1.血球计数板的构造
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1m，深度为，其体积为0.1mm3。
计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造；它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成，见图。
2.血球计数板的使用
(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。
(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。
(3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。
(4)将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内。
(5)计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
(6)当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞)。
(7)对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
3.计算公式 (1)16格×25格的血球计数板计算公式：
酵母细胞数／ml=100小格内酵母细胞个数／100×400×104×稀释倍数
(2)25格x16格的血球计数板计算公式：
酵母细胞数／ml=80小格内酵母细胞个数／80×400×104×稀释倍数
4.血球计数板的清洁
血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95％的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。
五、思考题及实验作业
1.若更换不同放大倍数的目镜和物镜时，必须用物镜测微尺标定目镜测微尺，这是为什么
2.利用血球计数板时，注入的菌液为什么不能过多
‘贰’ 酵母膏麦芽汁液体培养基详细配置方法和步骤
麦芽粉 3g
酵母浸膏 0.1g
去离子水 1000 mL
调pH到7.2
配好之后按需要封装到锥形瓶，写好详细标签，两层封口膜一层报纸封口，高压蒸汽灭菌（121度30分钟），大概一个小时就好，看压强为零就可以取出来放到超净工作台（事先紫外灭菌15分钟），等凉下来后再加抗生素和接种，一般100mL培养基加100uL菌液，再封口放到摇床上，设置温度转速时间
（转载，仅供参考）
‘叁’ 酵母菌培养液是怎么配制的
YPD 或YEPD，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基，用于酵母菌的培养
配方：1% Yeast Extract（酵母膏） ，2% Peptone（蛋白胨） ，2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉
配制方法：
1 溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）于900ml水中，如制平板加入20g琼脂粉
2 高压 121度 20min
3 加入100ml 20gDextrose (glucose)（葡萄糖），(葡萄糖溶液灭菌后加入)
(3)酵母菌悬液怎么配置扩展阅读
酵母(saccharomyce) 是基因克隆实验中常用的真核生物受体细胞，培养酵母菌和培养大肠杆菌一样方便。酵母克隆载体的种类也很多。酵母菌也有质粒存在，这种2pm 长的质粒称为2um 质粒，约6 300bp。这种质粒至少有一段时间存在于细胞核内染色体以外，利用2pm 质粒和大肠杆菌中的质粒可以构建成能穿梭于细菌与酵母菌细胞之间的穿梭质粒。酵母克隆载体都是在这个基础上构建的。
酵母是一种单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。一种肉眼看不见的微小单细胞微生物，能将糖发酵成酒精和二氧化碳，分布于整个自然界，是一种典型的异养兼性厌氧微生物，在有氧和无氧条件下都能够存活，是一种天然发酵剂。
一般泛指能发酵糖类的各种单细胞真菌，可用于酿造生产，也可为致病菌——遗传工程和细胞周期研究的模式生物。酵母菌是人类文明史中被应用得最早的微生物。目前已知有1000多种酵母，根据酵母菌产生孢子（子囊孢子和担孢子）的能力，可将酵母分成三类：形成孢子的株系属于子囊菌和担子菌。不形成孢子但主要通过出芽生殖来繁殖的称为不完全真菌，或者叫“假酵母”（类酵母）。
‘肆’ 固定化酵母菌的操作过程
1、首先准备海盐酸纳、酵母以及氯化钠溶液以及一支注射管。