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如何配置琼脂糖溶液

发布时间: 2022-08-06 09:05:37

1. 配置1%的琼脂糖凝胶50ml,称量琼脂粉0.5g,5xTBE加多少

一般用TAE吧,你都说是5*,当然就是10mL再加40mL水啊,要是1*的直接加50就行了,小误差不要太在意。

2. 琼脂糖凝胶配方

琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂 糖,琼脂糖的熔点在62〜65°C之间,融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。[1]

中文名
琼脂糖凝胶
外文名
Agarose gel
颗粒大小
45-165um
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聚丙烯酰胺凝胶
琼脂粉的用法和用途
凝胶电泳
琼脂糖电泳图怎么看
基本内容
琼脂糖凝胶agarose gel

储藏温度:常温

商品名很多,常见的有,Sepharose(瑞典,pharmacia ),Bio-Gel-A(美国Bio-Rad)等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。

琼脂糖 Agarose,缩写为AG,是琼脂中不带电荷的中性组成成份,也译为琼胶素或琼胶糖。琼胶糖化学结构由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基单位构成.

把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,冷却制成的凝胶。制成的小颗粒用于凝胶过滤。适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤,若使用5%以下浓度的凝胶,也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点,有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支持物。

3. 如何配制2%琼脂糖溶液

秤一克琼脂糖,加100毫升蒸馏水。
但是,一般跑电泳的时候,需要加tae缓冲液,50×tae加2毫升,再加98毫升蒸馏水。
配琼脂糖,差一两毫升没什么影响的,我们实验室用的是百分之二的。

4. 琼脂糖凝胶的配制

称量、溶胶、倒胶、拔梳。
配置步骤如下:
1、称量,小胶板0.8%的胶需要琼脂粉0.104gTBE13mL。
2、熔胶,将所称量的琼脂粉与TBE在锥形瓶中混合,在微波炉内反复加热2到3次至琼脂粉溶解并无气泡。
3、倒胶,干净的胶槽内摆好梳子,往胶内滴加1uL左右核酸染料,混匀,待冷却至不烫手,轻轻倒入胶板内。
4、拔梳待大约2分钟即可。

5. 琼脂糖凝胶怎么配制

把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,倒入玻璃杯中,冷却制成的凝胶。融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。即完成琼脂糖凝胶的配置。

制成的小颗粒用于凝胶过滤,适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤,若使用5%以下浓度的凝胶,也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点,有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支持物。

(5)如何配置琼脂糖溶液扩展阅读:

琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂糖,琼脂糖的熔点在62〜65°C之间,多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。

琼脂由琼脂糖和琼脂果胶两部分组成:

作为胶凝剂的琼脂糖是不含硫酸酯的非离子型多糖,是形成凝胶的组分,其大分子链链节着1,3苷键交替相连的β-D-半乳糖残基和3,6-内醚-L-半乳糖残基 。而琼脂果胶是非凝胶部分,是带有硫酸酯、葡萄糖醛酸和丙酮酸醛的复杂多糖,也是商业提取中力图去掉的部分。

商品琼脂一般带有2%~7%的硫酸酯,0%~3%的丙酮酸醛及1%~3%的甲乙基。在工业上的琼脂 色泽由白到微黄,具有胶质感,无气味或有轻微的特征性气味,琼脂不溶于冷水,易溶于沸水。

琼脂系选用优质天然石花菜、江蓠菜、紫菜等海藻为原料,采用科学方法精炼提纯的天然高分子多糖物质。

琼脂为亲水性胶体,分有条状和粉末状,不溶于冷水,易溶于热水。琼脂在工业上具有独特的重要性,琼脂的浓度即使低至1%仍能形成相当稳定的凝胶,是食品工业、化学工业、医学科研所必需之原料。

6. 低熔点琼脂糖凝胶怎么配制

搜索了很久终于找到啦!哈哈!不要太感谢哥哈!1. 琼脂糖凝胶的制备⑴琼脂糖凝胶的制备:称取0.3g琼脂糖,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE缓液,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE缓液,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE缓液,将该三角瓶置于微波炉加热至琼脂糖溶解。将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液,加入溴化乙锭,充分混匀。⑵胶板的制备:①取有机玻璃内槽,洗净、晾干;②将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上,安好挡板,放好梳子。吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘,任其凝固,在距离底板0.5~1.0mm的位置上放置梳子,以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔。如果梳子距离玻璃板再近,则拔出梳子时孔底将有破裂的危险,破裂后将使样品在凝胶与玻璃板之间渗漏。③将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中,使胶液缓慢地展开,直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。凝胶的厚度在3~5mm之间,检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡。 ④室温下静置30min左右,待凝固完全后,轻轻拔出梳子,在胶板上即形成相互隔开的上样孔。制好胶后将铺胶的有机玻璃内槽放在含有0.5~1×TAE(Tris-乙酸) 或TBE(Tris-硼酸)工作液的电泳槽中使用,没过胶面1mm以上。(注:溴化乙锭是一种强烈的诱变剂并有中度毒性。使用含有该染料的溶液时必须戴手套。使用完后应该进行净化处理。通常用水配制成10mg/ml的贮存液在室温下避光储存,使用终浓度为0.5μg/ml。)

7. 配置琼脂糖胶时,可以用蒸馏水和高浓度的TAE液吗

1.用蒸馏水将制胶工具洗干净 准备好制胶平板 用琼脂将模具边缘封闭 架好梳子
2.根据要分离的样品(DNA)大小配制合适浓度的琼脂凝胶 准确的称取一定量的琼脂糖干粉 加入到合适体积的锥形瓶中 加入一定量的电泳缓冲液(30ml左右TAE) 放入到微波炉内加热融化 冷却片刻(不烫手即可)
3.融化后的琼脂溶液摇晃混匀 倒入电泳槽中 等其凝固
4.室温下凝固30-40min左右 小心的拔出梳子 取出凝固好的凝胶放入电泳槽内 准备上样
5.在电泳槽中倒入电泳缓冲液(TAE)没过胶面1mm左右 去除胶孔内的气泡
6.上样 5ulDNA样品加入1ul上样缓冲液(loading buffer)和1ul的染料 用抢混匀后加入到凝胶孔内
.上样结束 接通电源 红色正极 黑色负极 DNA样品有负极往正极运动 加样孔侧为负 40-50v电压 电压30敏左右即可(< 40min)
8.电压结束 关闭电源 凝胶成像仪上观察电压位置并比对marker判断大小

8. 琼脂糖凝胶是用什么液体配置的

主要的原因是保持琼脂凝胶和周围的缓冲体系保持相同的pH值,当然这种pH值是前人优化过的,最有利于核酸分离和稳定的pH条件;如果凝胶和缓冲体系的pH存在较大的差异,势必会影响核酸的分离效果。

9. 我想问跑琼脂糖电泳时,loading buffer 的配方

一般琼脂糖凝胶loading buffer 配成10倍贮存液,如下:
20%(w/v) Ficoll 400
0.1mol/L Na2EDTA,PH8.0
1.0%(w/v)SDS
0.25%(w/v)溴酚兰
0.25%(w/v)二甲苯青

注意溶液为电泳缓冲液,用时加入上样体积的十分之一就行了
另外,买DNA marker 时一般都会附送loading buffer