㈠ 凝血酶原时间(PT) 检测方法及使用的设备和试剂盒名称
这个试剂盒有国产的也有进口的,国产的建议用南京建成生物公司的,很便宜,技术支持也比较到位。
货号:F007 凝血酶原时间(PT)测试盒(2ml*10瓶) 360.00元
也有进口的。比如Human Prothrombin,PT ELISA Kit,RB的,Abnova的。这些都要在生物技术公司代购。
还有一种解决方法是找生物公司帮你们做,也是可以的。
【产品名称】 凝血酶原时间检测试剂盒(凝固法)
【包装规格】 PT试剂:2.0ml×10; PT试剂溶解液:5.0ml×4
【预期用途】 本试剂盒用于体外检测人血浆凝血酶原时间(PT),以定性筛查外源凝血系统情况。
【主要组成成分】 PT试剂:兔脑粉盐水抽提物(冻干品); PT试剂溶解液:氯化钙溶液。 【储存条件及有效期】 1.本试剂盒2℃~8℃保存有效期为12个月; 2.复溶试剂2℃~8℃保存有效期为7天; 3.复溶试剂37℃保温稳定8小时。
【适用仪器】 手工法或半自动血凝分析仪。
【样本要求】 静脉采血,1份抗凝剂(0.109mol/L枸橼酸三钠)采集9份全血 ,轻轻颠倒混匀,以2700g(离心半径18cm约3500转/分)离心10分钟,分离血浆待测。如该血浆不能立即分析,应将其密封后于2℃~8℃保存,最长不超过4小时;或立即置-20℃以下冻存不超过一个月;-70℃以下冻存,不超过半年,用时37℃融化,避免反复冻融。
【检验方法】 试剂准备: 1.每瓶PT试剂准确加入2.0ml PT试剂溶解液,轻摇溶解; 2.取适量复溶后PT试剂,置37℃保温。 实验步骤: 1.取待测血浆或正常凝血质控血浆※0.1ml,37℃保温3分钟; 2.迅速加入0.2ml已预温至37℃的PT试剂,混匀,立即计时,记录其凝固时间,即为凝血酶原时间(PT)。) 如采用血凝分析仪测定,请参考仪器使用说明书。 ※ 该正常凝血质控血浆不包含在此试剂盒内。 结果计算: 1.凝血酶原时间秒值(PTs):即测得的凝固时间(正常或异常血浆样本PTs) 被检血浆PTs 2. PT比值(PTR)= ────────── 正常凝血质控血浆PTs 3. 国际标准化比值(INR)= PTRISI
【参考范围】 1.以PTs值表示:10~15秒。 2.以PTR表示:0.95~1.24。 3 监测口服抗凝剂,以INR表示。 注:上值仅供参考,建议各实验室建立自己的参考值范围。试剂、仪器操作、血样收集技术或抗凝剂改变时,都应重新建立新的参考值范围。
【检验结果的解释】 1.与正常凝血质控血浆PTs值比较,超过3秒以上为异常。 2.PTR值超出0.95~1.24的范围为异常。 3.监测口服抗凝剂,以INR表示。
【注意事项】 1.本品仅用于体外诊断。 2.抽血要顺利,抗凝要充分,不能有血凝块;分离血浆时,务必去除血小板。 3.保温温度控制在37±0.5℃,过高或过低均会影响测定结果。 4.样品收集时不宜用EDTA、肝素或草酸盐作抗凝剂。 5.手工测定时,观察凝固的光线要充足。 6.抗凝剂的比例应准确,如果血球压积小于20%或大于55%,则需调整血样与抗凝剂的比例,方法是:0.00185×全血毫升数×(100-压积)= 抗凝剂毫升数。 7.防止试剂被任何痕迹量的血浆污染。 8.不要测试质量可疑的样品血浆。因为很小的血浆凝固会使凝固时间显着缩短(所有凝血因子已被激活),而广泛凝固又会因凝血因子和纤维蛋白原的消耗延长凝固时间。 9.凝血酶抑制剂出现在样品中可能导致该样品凝血酶原时间延长。 10.使用者若不慎将试剂溅在皮肤或眼睛上,应立即用水冲洗。
㈡ 血友病甲能用凝血酶吗怎样用用什么类型的谢谢!
据我所知是没用的,凝血酶原是混合物,包含了好几种凝血因子,但是没用8号因子,血友病甲是缺乏8号因子,因此要用8号因子才行,最好是用纯的凝血因子八效果好,如果没有,可以用冷沉淀,效果也还可以,冷沉淀也是混合物,内含凝血因子八。
㈢ 如何提取凝血酶
采用柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取得到的凝血酶原纯度更高。
柠檬酸钡吸附法 1。提取:血浆中加入溶液溶液1.0 mol/L BaCl2溶液,体积比为10∶1,4℃搅拌30 min,静置30 min后,3 000 r/min离心30 min,弃上清。沉淀用溶液0.02 mol/L Tris,0.15 mol/L BaCl2,0.10 mol/L NaCl,pH7.4; 洗涤,3 000 r/min离心15 min,弃上清。重复洗3次。沉淀用溶液0.02 mol/L Tris, 0.10 mol/L NaCl,0.20 mol/L Na2EDTA,pH7.4解吸附,4℃搅拌0.5~1h,3 000 r/min离心15 min取上清。上清液用溶液0.02 mol/L Tris,0.15 mol/L NaCl,pH6.5.于4℃透析过夜。3 000 r/min离心15 min取上清液,即为凝血酶原溶液。
2 凝血酶原激活 用2 % Na2CO3溶液将凝血酶原溶液的pH调至7.1,加入0.25 mol/L CaCl2溶液,使Ca2+终浓度为0.03 mol/L,再用2 % Na2CO3溶液将凝血酶原溶液的pH调至7.1,室温静置2 h,过滤即得凝血酶溶液。
㈣ 凝血酶原复合物包括…
主要成分一般有;凝血因子Ⅱ(凝血酶原)、Ⅶ(促凝血酶原激酶原)、Ⅸ(抗血友病球蛋白B)、Ⅹ(自体凝血酶原C),主要作用都是凝血过程的传导,他们的作用都不是直接参与凝血,而是激活凝血因子Ⅰ(纤维蛋白原),凝血因子Ⅰ才是直接凝血的物质。
㈤ 凝血酶原与凝血酶的区别以及最适PH是多少
凝血酶原不具有生物学活性。
凝血酶是凝血瀑布中心反应的产物,在凝血酶原酶催化下,凝血酶原转变成凝血酶。一旦生成后其作用广泛。
ph7.35-7.45
㈥ 凝血酶原活动度(PTA)的计算公式
凝血酶原是一种重要的凝血因子,和凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ有关,均在肝细胞内合成。凝血酶原时间(PT)其正常值在12~14秒。肝病时肝细胞损害早期即可有PT延长。肝细胞损害越严重,PT延长越明显。凝血酶原时间是判断重型肝炎预后的一项重要指标。若PT延长值20秒,则预后不良。
凝血酶原活动度和凝血酶原时间的意义相同,且更能准确地反映凝血因子的活性。凝血酶原活动度(%)=(正常人凝血酶原时间-8.7)/(患者凝血酶原时间-8.7)×100%。
凝血酶原活动度的计算公式:PTA=〔对照PT-(对照PT×0.6)〕÷〔患者PT-(对照PT×0.6)〕×100%正常值75%~100%。凝血酶主要使用本品用于手术中不易结扎的小血管止血、消化道出血及外伤出血等。建议通常情况下是不会用到这个药物的,只有在消化道出血的情况下才会使用。并且一定要遵医嘱用药的。
㈦ 凝血酶原酶复合物与凝血酶原复合物之差别
1、概念不同
由内源性和外源性凝血途径所生成的FⅩa,在Ca2+存在的情况下,与FⅤa在磷脂膜表面形成的 FⅩa-FⅤa-Ca2+磷脂复合物,称凝血酶原酶复合物。
凝血酶原复合物(Thrombogen)由健康人体新鲜血浆分离提取,为含凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、X及少量其他血浆蛋白的混合制剂。本品200u所含凝血因子相当于200ml血浆中所含的量。
2、形成过程不同
凝血酶原酶复合物的形成属于生理性凝血过程之一,生理性凝血过程分为凝血酶原酶复合物的形成、凝血酶原的激活和纤维蛋白的生成三个基本步骤。凝血酶原复合物则是人工制剂,需从人体的新鲜血浆中分离提取。
(7)凝血酶原混合物如何配置扩展阅读:
凝血酶原复合物适应症:
1、主要用于预防和治疗因凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ及Ⅹ缺乏导致的出血,如乙型血友病、严重肝病(如急性重型肝炎、肝硬化等)、弥散性血管内凝血(DIC)及手术等所致的出血。
2、用于逆转抗凝剂(如香豆素类、茚满二酮等)诱导的出血。
3、对已产生凝血因子Ⅷ抑制性抗体的甲型血友病患者,使用本药也有预防和治疗出血的作用。
4、对继发性维生素K缺乏的新生儿、口服广谱抗生素者,仅宜在严重出血或术前准备中使用本药。
5、治疗敌鼠钠盐中毒。
㈧ 凝血酶原复合物的生成是怎样生成的
血液凝固是一系列生物化学的结果,最后阶段是血浆中的一种可溶性的纤维蛋白原血液凝固包括三个基本步骤: ①凝血酶原酶复合物的生成; ②凝血酶原的激活
㈨ 凝血酶原的组成
凝血酶原在电泳上分布在α2-球蛋白部分,等电点为pH4.2。含于Cohn分带Ⅲ/2之中。可被67%饱和的硫酸铵盐析。可用BaSO4、MgSO4吸附。在机体内的半减期为23—36小时。它在凝血过程中变为凝血酶,其大部分可被消耗掉,残存在血清中者在15%以下。凝血酶原生成于肝脏,生成时有维生素K参与。
凝血酶原是由肝脏合成的维生素K依赖因子之一(其他有因子Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、蛋白C、蛋白S和骨-羧基谷氨酸蛋白质)。含579个氨基酸残基的单链糖蛋白,分子量72,000.自N-末端起,有1个Gla区(1-40),2个环区(41-271)和1个催化区(271-579)。Gla区内含10个r-羧基谷氨酸残基,主要功能为通过结合钙离子与磷脂联结。环区参与其与底物和辅因子间的相互作用,环区2可与FⅤa结合,并含有FⅩa的作用位点组氨酸205~精氨酸220。催化区包括激活区和丝氨酸蛋白酶区。在钙离子、FⅤa和磷脂的参与下,凝血酶原被FⅩa激活。凝血酶原单独在精氨酸320处裂解生成一个中间产物,进一步分别在精氨酸284和精氨酸155处裂解生成凝血酶和凝血酶原片段1及凝血酶原片段2。凝血酶由A链和B链经二硫键联结组成,含308个氨基酸残基,分子量36,000。A链含49个氨基酸残基,又称轻链,其功能不明。B链含259个氨基酸残基,又称重链,是酶活性所在的部位,凝血酶原催化区中的丝氨酸蛋白酶即在B链。丝氨酸蛋白酶区具有蛋白酶活性,含识别并裂解底物的部位,酶活性氨基酸为组氨酸363,天门冬氨酸419和丝氨酸525,该区精氨酸382-精氨酸393片段称为阴离子结合部位,是凝血酶原与纤维蛋白原,血栓调节蛋白和水蛭素作用的部位。