㈠ 什麼是色譜柱
暈。。。上面都不知說些什麼!!我簡單的說一下吧:
色譜柱是一種以凝膠填充的柱子(長的,圓柱形的柱狀容器,兩頭各有一孔,進液和出液口,分實驗室用的和工業用的,區別就是大小不一樣,但都叫層析柱)。凝膠分很多種,一般來說要分離的物質而具體定,層析柱都是用來分離和提純物質的………………
與你的問題扯遠了!色譜柱是習慣的叫法正確的叫層析柱,色譜法!
㈡ 有了解色譜柱的嗎詳細解釋一下,謝了
一. 氣相色譜柱的分類
色譜柱是由柱管和固定相組成,按照拄管的粗細和固定相的填充方式分為(1)填充柱;(2)毛細管柱。
二. 填充柱氣相色譜固定相
在影響色譜柱分離效果的諸多因素中選擇適當的色譜固定相是關鍵。必須使待測各組分在選定的固定相上具有不同的吸附或分配,才能達到分離的目的。
(一)氣-液色譜(分配色譜)固定相
氣-液色譜的固定相是由高沸點物質固定液和惰性擔體組成。
1. 擔體(或載體) 是一種化學惰性的多孔固體顆粒,支持固定液,表面積大, 穩定性好(化學、熱),顆徑和孔徑分布均勻;有一定的機械強度,不易破碎。
(1)擔體的種類和性能:
硅藻土型:紅色硅藻土擔體—強度好,但表面存在活性中心,分離極性物質時色譜峰易拖尾;常用於分離非、弱極性物質。
白色硅藻土擔體—表面吸附性小,但強度差,常用於分離極性物質。
非硅藻土型擔體:
有氟擔體,適用於強極性和腐蝕性氣體的分析;玻璃微球,適合於高沸點物質的分析;高分子多孔微球既可以用作氣-固色譜的吸附劑,又可以用作氣-液色譜的擔體。
(2)擔體的預處理:除去其表面的活性中心,使之鈍化。
酸洗法(除去鹼性活性基團);
鹼洗法(除去酸性活性的基團);
硅烷化(消除氫鍵結合力);
釉化處理(使表面玻璃化、堵住微孔)等。
2.固定液——塗在擔體上作固定相的主成分
(l)對固定液的要求:
化學穩定性好:不與擔體、載氣和待測組分發生反應;
熱穩定性好:在操作溫度下呈液體狀態,蒸氣壓低,不易流失;
選擇性高:分配系數 K 差別大;
溶解性好:固定液對待測組分應有一定的溶解度。
(2)組分與固定液分子間的相互作用:
組分與固定液分子間相互作用力通常包括:靜電力、誘導力、色散力和氫鍵作用力。
在氣-液色譜中,只有當組分與固定液分子間的作用力大於組分分子間的作用力,組分才能在固定液中進行分配。選擇適宜的固定液使待側各組分與固定液之間的作用力有差異,才能達到彼此分離的目的。
(3)固定液的分類:固定液有四百餘種,常用相對極性分類。
(a)規定強極性的b,b』-氧二丙腈的相對極性 P=100;
(b)規定非極性的角鯊烷(異三十烷)的相對極性 P=0;
(c)其它固定液與它們比較,測相對極性:選一物質對正丁烷—丁二烯分別測得它們在這兩種固定液及被測柱上的相對保留值 q:
(1)
則,被測固定液的相對極性 Px 為:
(2)
q1、q2、qx 分別為物質對正丁烷—丁二烯在氧二丙腈、異三十烷、被測柱上的相對保留值。
把 P= 0~100之間分為五級,20為一級,以「+」表示。+l、+2為弱極性;+3為中等極性;+4、+5為強極性。通常把非極性固定液的相對極性以「-」表之。如阿皮鬆L級別為「-」,是非極性固定液;鄰苯二甲酸壬酯級別為「+2」,是弱極性固定液。
(4)固定液的選擇:
一般是根據試樣的性質(極性和官能團),按照「相似相溶」的原則選擇適當的固定液。
具體可從以下幾方面考慮:
l)分離非極性混合物一般選用非極性固定液
組分和固定液分子間的作用力主要是色散力。
試樣中各組分按沸點由低到高的順序出峰。
常用的有:角鯊烷(異三十烷)、十六烷、硅油等;
2)分離中等極性混合物一般選用中等極性固定液
組分和固定液分子間的作用力主要是色散力和誘導力。
試樣中各組分按沸點由低到高的順序出峰。
3)分離極性組分選用極性固定液
組分和固定液分子間的作用力主要是定向力。
待測試樣中各組分按極性由小到大的順序出峰。
例如:用極性固定液聚乙二醇一20M分析乙醛和丙烯醛時,極性較小的乙醛先出峰。
4)分離非極性和極性(易極化)組分的混合物選用極性固定液:
非極性組分先流出,極性(或易被極化)的組分後出峰。
例如:採用中等極性的鄰苯二甲酸二壬酯作固定液,沸點相差極小的苯(沸點80.l℃)和環乙烷(沸點為80.8℃)可以定量分離,環己烷先出峰,若採用非極性固定液則很難使二者分離。
5)對於能形成氫鍵的組分選用強極性或氫鍵型的固定液
如:多元醇、腈醚、酚和胺等的分離,不易形成氫鍵的先出峰。
(二)氣-固(吸附)色譜固定相——固體吸附劑
1. 活性炭:非極性吸附劑,分析低碳烴和氣體及短鏈極性化合物。
2.氧化鋁:弱(中等)極性吸附劑,主要用於分析C1~ C4 烴類及其異構體。
3.硅 膠:強極性吸附劑,常用於分析硫化物:COS、H2S、SO2等。
4. 分子篩(人工合成的硅酸鹽):強極性吸附劑,用於在室溫條件下使H2,O2,N2,CH4,CO得到良好分離。
5. 高分子多孔微球:極性和非極性吸附劑,可分析極性的—多元醇、脂肪酸、腈類、胺類 或 非極性的—烴、醚、酮等;尤其適合分析有機物中的微量水。
㈢ 色譜柱是什麼
色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃製作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均採用填充柱。
色譜柱的分離效果取決於所選擇的固定相,以及色譜柱的制備和操作條件。色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。
色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環)、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼製成,壓力不高於70 kg/cm2 時,也可採用厚壁玻璃或石英管,管內壁要求有很高的光潔度。
為提高柱效,減小管壁效應,不銹鋼柱內壁多經過拋光。也有人在不銹鋼柱內壁塗敷氟塑料以提高內壁的光潔度,其效果與拋光相同。
還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用於細管柱。色譜柱兩端的柱接頭內裝有篩板,是燒結不銹鋼或鈦合金,孔徑0.2~20μm(5~10&μm),取決於填料粒度,目的是防止填料漏出。
(3)色譜柱存儲條件擴展閱讀
色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類,尺寸規格也不同:
1、常規分析柱(常量柱),內徑2~5mm(常用4.6mm,國內有4mm和5mm),柱長10~30cm;
2、窄徑柱(narrow bore,又稱細管徑柱、半微柱semi-microcolumn),內徑1~2mm,柱長10~20cm;
3、毛細管柱(又稱微柱microcolumn),內徑0.2~0.5mm;
4、半制備柱,內徑>5mm;
5、實驗室制備柱,內徑20~40mm,柱長10~30cm;
6、生產制備柱內徑可達幾十厘米。柱內徑一般是根據柱長、填料粒徑和摺合流速來確定,目的是為了避免管壁效應。
㈣ 如何選擇色譜柱和色譜分析條件
氣相色譜操作條件的選擇,常常決定是否能夠達到分離的目的,而選擇試驗條件的主要依據是范氏方程和分離度與各種色譜參數的關系式。氣相色譜柱分析條件的選擇主要包括柱溫、載氣種類和流速等的選擇。適當的分析條件,可以在較短的時間內完成分析工作,並達到良好的定性定量目的。在日常工作中,如何進行色譜柱分析條件的選擇呢?解決方案「柱溫的選擇
柱溫是影響分析時間和分離度的重要因素。選擇柱溫的依據是樣品的沸點范圍,固定液的配比,允許使用溫度,以及檢測器的靈敏度。柱溫主要影響分配系數、容量因子以及組分在流動相和固定相中的擴散系數,從而影響分離度和分析時間。選擇溫柱的原則,一般是在使難分離物質對達到要求的分離度條件下,盡可能採用低溫柱,其優點是可以增加固定相的選擇性,降低組分在流動相中的縱向擴散,提高柱效,減少固定液的流失、延長柱壽命和降低檢測器的本底。提高柱溫可以使保留時間減少,加快分析速度,使樣品中組分完全流出,但是分離效果不好。降低柱溫,樣品有較大的分配系數,選擇性高,有利於分離。但溫度過低,容易引起峰形拖尾或前伸,並且分析時間長。可根據固定液的使用溫度極限和樣品組分沸點調節柱溫。對於高沸點混合物,在保證分離完全的前提下,盡量降低柱溫。可在低於分析物沸點180℃~200℃的柱溫下進行分析;對沸點不太高(200~300℃)的樣品,柱溫可選100℃以下;對於氣體、氣態烴等低沸點混合物,一般選擇室溫或50℃以下進行分析。對於寬沸程樣品,需採用程序升溫法進行分離,即柱溫按預先設定的程序隨時間成線性或非線性增加,從而獲得最佳的分離效果。
「載氣的選擇
一般說來,痕量分析或毛細管色譜的載氣純化程度,要高於常規分析。特別是電子捕獲、熱導池檢測器,載氣純度直接影響靈敏度和穩定性,一定要嚴格凈化。根據分析對象,對於色譜柱的類型,操作儀器的檔次和具體檢測器,若使用不合要求的低純度氣體,不良影響有以下幾種可能:a.樣品失真或消失:如H 2 O氣使氯硅樣品水解;b.色譜柱失效:H 2 O,CO 2使分子篩柱失去活性,H 2 O氣使聚脂類固定液分解,O 2使PEG固定液斷鏈;c.有時某些氣體雜質和固定液相互作用而產生假峰;d.對柱保留特性的影響:如H 2 O對聚乙二醇等親水性固定液的保留指數會有所增加,載氣中氧含量過高時,無論是極性或是非極性固定液柱的保留特性,都會產生變化,使用時間越長影響越大;e.檢測器:TCD:信噪比減小,無法調零,線性變窄,文獻中的校正因子不能使用,氧含量過大,使元件在高溫時加速老化,減少壽命;FID:特別是在Dt≤1×10-11/S下操作時,CH 4等有機雜質會使基流激增,雜訊加大不能進行微量分析;f.在做程序升溫操作時,載氣中的某些雜質,在低溫時保留在色譜柱中,當柱溫升高時不但引起基線漂移,還可能在譜圖上出現比較寬的「假峰」;g.儀器影響:各類過濾器加速失效;調節閥(穩壓閥,穩流閥,針形閥) 被污染,氣阻堵塞,調節精度降低或失靈;氣路系統被污染,若要恢復儀器在高靈敏度情況下操作,有時要吹洗很長時間(可能一周以上), 污染嚴重時有時再也無法恢復;對於FID,水蒸氣會影響分析結果,直至影響檢測器的壽命;對ECD和TCD的壽命最明顯,這點應引起用戶特別注意。
「載氣的壓力和流速
載氣壓力對柱效率有直接的影響。如提高柱內壓力,有助於提高柱效率。但只提高入口壓力,使流速加大且壓降太大時,反而會降低柱效率,因此也必須提高出口壓力。一般採用在柱後加裝適當氣阻的方法來解決這一問題。載氣流速主要影響分離效率和分析時間。為獲得高柱效,應選用最佳流速,但所需分析時間較長。為縮短分析時間,一般選擇載氣速度要高於最佳流速,此時柱效雖稍有下降,卻節省了很多分析的時間。常用的載氣速度流速為20~80mL/min。對於FID 或FPD 檢測器,氫氣和空氣的比例是影響分離度和靈敏度的重要因素,只有反復試驗,才能確定最適合的比例。對於填充柱色譜柱,載氣流入方向要盡量與色譜柱內固定相裝填方向一致,以減小壓差,提高效率。
「進樣量的選擇
進樣量的多少直接影響譜帶的初始寬度。因此,只要檢測器的靈敏度足夠高,進樣量越少,越有利於得到良好的分離。一般情況下,柱越長,管徑越粗,組分的容量因子越大,則允許的進樣量越多。一般氣體進樣量在1~10mL,液體進樣量在0.5~10μL 之間,可取得較好的分析效果。此外,進樣速度要快,進樣時間要短,以減少縱向擴散,有利於提高柱效。
「氣化溫度的選擇
氣化溫度取決於樣品的揮發性、沸點范圍及進樣量等因素。氣化溫度選擇不當,會使柱效下降。通常氣化室的溫度選擇為樣品沸點或高於沸點,以保證樣品能瞬間氣化;但不要超過沸點50℃以上,以防止樣品分解。對於一般的氣相色譜分析,氣化溫度比柱溫高10~50℃即可。但對於某些高沸點組分或熱穩定性差的組分,在其沸點左右分析會產生分解現象。此時應採取的措施是減少進樣量,採用高靈敏度檢測器,氣化室溫度的選擇應低於其沸點100~200℃。從以上介紹的選擇原則可以看出,各種條件往往同時影響色譜柱的選擇性和效率,它們之間既密切聯系又互相制約。因此在實際分析中,要作綜合考慮,靈活地運用這些原則,既要保證良好的選擇性,又要保證分離效率,合理地選擇最佳色譜分析條件。
㈤ 液相色譜柱應該如何使用和維護
一、使用前准備
1、使用前認真閱讀色譜柱的說明書,了解色譜柱的種類,選用合適的色譜柱。
在選用色譜柱時,應充分考慮所分析樣品的極性大小、化合物的種類數量、結構特徵。根據化合物的性質,選擇合適的色譜柱和分析條件。不同類型的色譜柱使用的流動相不同,使用錯誤的流動相會降低柱效,損傷柱子。如分析極性較大的多糖類成分,應當採用親水性的反相填料。對於首次使用的色譜柱,還應按照廠家的出廠說明對色譜柱進行低流速的沖洗活化,活化後的色譜填料共價鍵鍵合力增強,柱效提高,壽命延長。
2、樣品的准備與預處理
我們的經驗是樣品純化得越干凈,色譜柱的使用壽命越長。許多樣品,尤其是生物樣品,組份非常復雜,對色譜柱的損傷性較大,不經預處理的樣品直接分析,會嚴重縮短色譜柱的使用壽命。因此,在樣品的准備時需對樣品進行預處理,包括准備溶劑的選擇、樣品過濾等。
2.1 制樣溶劑的選擇
制樣溶劑通常需要考慮樣品的溶解性、與流動相的相溶性、色譜填料的適用性等方面。這類溶劑需對樣品有較大的溶解性,而且與流動相溶,洗脫強度最好低於流動相或梯度洗脫中的起始流動相,以免影響樣品分離。目前許多手性色譜柱都禁止使用DMSO、四氫呋喃、氯仿等溶解樣品,這些溶劑會破壞固定相的結構,從而縮短色譜柱的使用壽命。此外,制樣溶劑還應與色譜系統其他部件如高壓泵、進樣器等相適用。
2.2 制樣溶劑過濾
在進樣前需過濾樣品溶液,如採用0.22μm的微孔濾膜除去不溶性微粒,以免堵塞柱頭濾片及柱內填充床。在條件允許的情況下,最好採用與色譜柱同種填料的固相萃取柱過濾進樣溶液,可以減少在色譜柱上死吸附的物質或易堵塞的大分子樣品。如生物樣品中的小極性的油脂類易於沉澱死吸附在C18反相色譜柱中,導致柱效降低、柱壓升高。採用SPE柱過濾後,可以有效減少在色譜柱中附著沉積的死吸附成分,保護色譜柱不被污染,保證其使用壽命。
2.3 其他,如溶液濃度、進樣量等
分析物的某些性質同樣能影響色譜柱的使用壽命。強酸、強鹼性物質和蛋白質類生物大分子,它們能與固定相填料作用,或生成不可逆吸附層,改變填料表面特徵,使色譜柱性能發生變化,最終導致分離失效。此外樣品的進樣量過大、超載都會影響色譜柱的分離性能和使用壽命。
二、使用過程中的維護
1、流動相的使用和分析方法的選擇
流動相的純度、溶劑的選擇、適當分析方法的使用與色譜柱的性能和壽命密切相關。
1.1 流動相的選擇
所選用的流動相應與色譜柱、待分析樣品相兼容,即樣品、樣品溶液和流動相是互溶的。流動相能夠溶解樣品,避免樣品沉澱析出;同時還要求流動相與樣品不發生化學反應,並且要求與色譜柱不能發生溶解或化學反應。
色譜分析應選擇色譜級的流動相。通常分析純的溶劑含有微量雜質,如有機溶劑中的聚乙二醇、無機鐵離子(Fe+)等,作為流動相大量使用後會引起色譜柱性能變化。最好是使用色譜純級或者更高純度的試劑,盡量降低溶劑中雜質帶來的損傷。
1.2 流動相過濾
使用色譜純試劑配製流動相,使用前需經0.45μm或者更小孔徑的濾膜過濾和超聲脫氣處理,減少灰塵、微生物等雜質堵塞色譜柱,尤其是水溶性流動相易引起微生物生長而造成色譜柱阻塞。流動相最好是現配現用,放置時間最好不要超過2天。
1.3 流動相的pH和緩沖鹽的選擇
極端pH的流動相會破壞填料內的共價鍵,「溶解」硅膠,使固定相流失,從而降低柱效,縮短使用壽命。以硅膠作基質的固定相一般要求pH在2.5~7范圍內使用。長期在pH>7或pH<2使用環境中,硅膠會逐漸溶解或者表面鍵合的官能團會逐漸流失。如果一定要用高或低pH的流動相,最好是選用相適應的色譜填料。
1.4 流速的控制
目前粒徑為1.8μm的UPLC的流速常設為0.3~0.5mL/min,粒徑為5μm的HPLC分析流速不大於1.5mL/min,粒徑為10μm半制備柱流速控制在3mL/min。流速過大,壓力升高,會引起色譜填料沖垮、塌陷。
2、色譜儀器的操作
每次開機使用分析儀器時,泵啟動太快,流速和柱壓的瞬間升高,柱床受到沖擊,引起紊亂,產生空隙,影響色譜柱的使用壽命。因此,在操作實驗開始時,應當將流速和柱壓逐漸增加。
3、保護柱的使用
「保護柱」是與所使用液相色譜柱相同填料的短型色譜柱,可以有效地阻攔容易損壞色譜柱的大分子和不溶性顆粒,過濾易沉著色譜柱上產生死吸附的物質,從而延長色譜柱使用壽命。
4、柱溫的控制
不同類型的色譜柱耐受的溫度各有差別。通常色譜柱溫維持在10~40℃之間,能夠充分、最優的發揮色譜柱的性能。超出色譜柱溫度范圍,尤其高於柱溫范圍,會增加對流動相中化學物質的吸附,引起色譜柱固定相結構的改變;此外,還可能引起柱床塌陷,改變峰形,降低柱效,產生不可逆性的損傷。
三、使用後的清洗與保存
柱子使用一段時間後,總會有一些雜質累積在柱內,保留值較弱的物質,一般能快速從色譜柱沖洗出來,不產生干擾;中等保留強度的雜質能被緩慢沖洗出來,但對分析產生一定的干擾;強保留雜質通常聚集在柱頭或色譜柱中,難以被洗脫,甚至可能與填料發生相互作用,形成新的偽固定相,改變色譜柱的分離性能。通常表現為柱壓升高、基線不平、色譜雙峰、分離性能降低等。這些被污染的色譜柱經清洗後,可恢復部分甚至大部分離能力。因此使用後認真、定期清洗,不僅能延長色譜柱的使用壽命,節省資源,還能大大降低分析的成本。以我們常用的硅膠基質色譜柱為例,簡要闡述常用色譜柱的清洗與再生。
1,色譜柱的清洗與再生
色譜柱的使用前後都需經較強的流動相沖洗。通常情況下,在使用硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱時,每次用完後可先用二氯甲烷或正己烷等溶劑低流速長時間的沖洗;鍵合反相硅膠色譜柱、離子交換色譜柱和凝膠色譜柱可先用高比例的水(甲醇水混合溶劑)沖洗,再用100%甲醇沖洗。此外,色譜柱低流速的反相沖洗能夠有效除去堵塞在柱頭或篩板上的雜質,以及清洗聚集在柱頭部位的較強吸附物質。有些色譜柱在許多方法處理污染失效後,反過來使用,不僅柱壓降變小,柱效也可恢復如,延長了色譜柱的使用時間。
若上述常規清洗法無法清除污染物,則有必要採用更強的洗脫劑清洗,如反相材料的沖洗順序為:100%甲醇→100%乙腈→乙腈∶異丙醇(75∶25,V/V)→100%異丙醇。或者可以採用較低濃度的稀酸或稀鹼可將有機溶劑不能洗脫的污染物除去。例如採用0.05mol/L的硫酸和流動相溶液沖洗色譜柱,可取得良好效果;或者採用1%氫氧化銨或50%二甲基甲醯胺水溶液,對聚集在柱頭的污染物具有良好的清洗效果。
如果分析時流動相中含有緩沖液(通常為鹽溶液),沖洗時宜用水取代緩沖液與有機相混合沖洗色譜柱(20倍柱體積);再用100%有機溶劑沖洗。若直接用100%有機溶劑沖洗,可造成緩沖液沉積析出,從而損壞柱子品質。同樣的,若流動相中加入酸、鹼溶液時,也應當按照上述方法,先採用高比例的水(水:甲醇10:90)沖洗20倍柱體積,防止強酸強鹼溶液導致硅膠基質填料的溶解。
蛋白質對反相色譜柱的污染已成為常見問題,尤其在分離未經處理的動物組織等生物樣品。一般情況下,純有機溶劑如乙腈或甲醇不能很有效地清洗色譜柱,因而需要一些特殊的清洗方法。首先嘗試用高比例強極性溶劑的流動相進行沖洗,如乙腈∶異丙醇(1:2,V/V);或使用0.1%的三氟乙酸水溶液或者0.1%乙酸水溶液清洗。此外,還可以採用1%十二烷基硫酸鈉 (SDS),然後用5%~95%乙腈/水(含0.1%TFA)梯度沖洗,去除蛋白污染物效果也較好。
若採用上述的條件清洗後色譜柱仍不能達到理想的效果,有必要將固定相從色譜柱內取出,進行清洗再生後重新裝填。具體操作是:將色譜固定相從色譜柱內打出後,用甲醇浮選,去除其中細小的破碎顆粒;然後用二甲基甲醯胺、丙酮、甲醇超聲清洗;最後乾燥固定相,重新裝填色譜柱。經該方法處理的色譜柱,性能可得到顯著提高。
2、色譜柱的保存
色譜柱的保存應按照使用說明書中所指明的溶劑進行填充,盡可能的貯存於100%有機溶劑。色譜柱不能貯存在水或含水量高的溶劑中,會引起微生物的滋生,影響色譜柱壽命。如反相色譜柱長期不用,最好採用90%~95%的有機溶劑混合水溶液保存,防止色譜柱因密封不嚴造成色譜柱兩頭乾涸、斷層引起的壽命縮短。
此外,色譜柱還應當輕拿輕放,避免劇烈碰撞引起的色譜柱填料產生塌陷、斷層,縮短使用壽命。答案來自
㈥ 色譜柱 一直在 酸性條件會怎麼樣
氣相色譜影響不是很大。因為載氣什麼的都是氣體。不會出現液相裡面什麼柱子被堵了的情況。不過有可能會不太干凈。因為載氣、包括發生器的氣體都是經過純化的,而空氣就不幹凈了。所以一般來說色譜柱保存時要求兩邊堵上堵頭(毛細管柱)如果已經進了氣體那也不會造成太大的影響,不過使用前要老化一下。避免出現雜峰,影響測定。
㈦ 色譜柱是什麼
色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃製作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均採用填充柱。
色譜柱的分離效果取決於所選擇的固定相,以及色譜柱的制備和操作條件。
色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。市售的用於HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達5~16萬/米。對於一般的分析只需5000塔板數的柱效;對於同系物分析,只要500即可;對於較難分離物質對則可採用高達2萬的柱子,因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要。
柱效受柱內外因素影響,為使色譜柱達到最佳效率,除柱外死體積要小外,還要有合理的柱結構(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術。即使最好的裝填技術,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏鬆,易產生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應。這種管壁區大約是從管壁向內算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統中,柱外效應對柱效的影響遠遠大於管壁效應。
簡單的來說色譜柱是色譜儀的分離單元。