❶ 感受態細胞為何放置於負八十冰箱保存
感受態細胞(competent cell):理化方法誘導細胞,吸收周圍環境中的DNA分子,使其處於最適攝取和容納外來DNA的生理狀態。 主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大,直觀的說,使得細胞膜表面出現一些孔洞,便於外源基因或載體進入感受態細胞。由於細胞膜的流動性,這種孔洞會被細胞自身所修復。
主要原理
通過處理使細胞的通透性變大
性質
活細胞
製作方法
CaCl2法
1.將快速生長的大腸桿菌置於經低溫(0℃)預處理的低滲氯化鈣溶液中,便會造成細胞膨脹,同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構,促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來,離開所在區域,誘導細胞成為感受態細胞
細胞壁通透性發生變化,極易與外源DNA相粘附並在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基-磷酸鈣復合物。
聯合其它的二價金屬離子(如Mn、Co)、DMSO或還原劑等物質處理細菌,則可使轉化率提高100~1000倍。
2.此時,將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激(90s),細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動,並隨機出現許多間隙,外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過復制、表達,實現遺傳信息的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀。
3.將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養,篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆。
❷ 細胞凍存可以一直放在-80℃嗎
會有些影響,在活率方面.70%的細胞應該沒問題.
1)傳統方法: 凍存管置於4℃ 40min--->-20℃ 30min--->-80℃ 16~18h
(或隔夜)--->液氮中長期儲存.
注意:-20℃不可超過1小時,以防止胞內冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些.
(2)程序降溫:利用已設定程序的程序降溫儀以-1~-3℃/min的速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮中長期儲存.
❸ 負八十度保存菌種 要多久能解凍
10小時左右。負八十度保存菌種拿出來之後放到常溫的場所10小時即可解凍。
❹ 細胞從負一百五移到負八十可保存多久
可以保存幾年的
加入80%的甘油混勻後凍存能保存幾年,這是常見的保菌的方法。
❺ 質粒可以放到負八十嗎
質粒可以在零下80度的環境下保存。
把攜帶質粒的菌種保存於20%的甘油於-80度可長期保存幾年,而僅保存質粒零下20度避免反復凍融就可以長期保存了。
質粒的分類:
1、根據質粒能否通過細菌的接合作用,可分為接合性質粒和非接合性質粒。接合性質粒帶有與接合傳遞有關的基因。非接合質粒在一定條件下通過與其共存的接合質粒的誘動或轉導而傳遞。
2、根據質粒在細菌內的復制類型可分為兩類:嚴緊控制型和鬆弛控制型。嚴緊控制復制型質粒的復制酶系與染色體DNA復制共用,只能在細胞周期的一定階段進行復制,當細胞染色體停止復制時,質粒也就不再復制。鬆弛控制復制型的質粒的復制酶系不受染色體DNA復制酶系的影響,在整個細胞生長周期中隨時都可以復制,在染色體復制已經停止時質粒仍能繼續復制。
3、根據質粒的不相容性,可分為不相容性和相容性。不相容性指結構相似、密切相關的質粒不能穩定地共存於同一宿主細菌內的現象,反之為相容性。常用於流行病學的調查。
以上內容參考:網路-質粒
❻ 細胞在負80冰箱能放多久
一般凍存盒中加入甘油的居多吧。丙二醇,異丙醇加入後,一方面防止由於溶液效應而使細胞脫水及蛋白質變性;另一方面在稍低於溶液冰點時人工強行誘導結冰,以免出現溶液過冷現象,防止結冰時釋放潛熱引起溫度回升,以及形成大的冰晶,減輕對細胞的損傷。在一步冷凍中.選用高濃度的滲透性保護劑組成的玻璃化溶液,在冷凍過程中,不發生結晶而形成玻璃樣固體,維持液態時的正常分子與離子分布,使細胞內發生玻璃化而起到保護作用