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裂解結合液如何配置

發布時間: 2022-04-29 10:06:33

1. 結合鹼裂解法提取質粒,配置溶液1為什麼使用ph酸度計

若無特殊考慮,Rnase加入到Buffer 1,並低溫保存是最好的。在最終收獲的質粒中加入,會帶來RNAase的污染,並會有寡核苷酸的帶入,並可能降低你質粒的得率,你需要考慮是否對你後續實驗有影響(是否還要去RNAase?)。
另一種情況,就是你忘記王Buffer1中提前加入RNAase,這時,乾脆就別加了,反正質粒都提完了,何必又帶來RNAase的污染?RNA不甚穩定,一般在破細胞時,大多會降解的。

想保持質粒完整,那就是在分別加Buffer2、buffer3時,避免劇烈混合,溫柔混合。這是關鍵!

個人見解,供您參考,祝愉快!

2. WB實驗時,細胞裂解液如何配置

組織裂解液(全細胞蛋提取):
1:Tris-HCL 50mmoL/L PH 7.4
2: Nacl 150 mmoL/L
3: 去氧膽酸鈉 0.25%
4:NP-40或Triton-x-100 1%
5: EDTA 1 mmoL/L
6: PMSF 1 mmoL/L
7: Aprotinin 1μg/ml
8: leupeptin 1μg/ml
9: pepstain 1μg/ml
其中:7,8,9作用不持久,要使用前加入。

細胞裂解液:1:NP-40裂解體系:150 mmoL/L Nacl
1.0%NP-40或Triton-x-100
50 mmoL/L Tris(PH8.0)
2:RIPA裂解體系:150 mmoL/L Nacl
1.0%NP-40或Triton-x-100
0.5%脫氧膽酸鈉
0.1%SDS
50 mmoL/L Tris( ph8.0)

3. 細胞裂解液配方

含 CTAB 的裂解液,主要用於富含多糖的樣品,如細菌、植物。

4. 配置裂解液.SDS sodium deoxycholate怎麼加

1%SDS,0.2MNaOH,這是鹼裂解法提質粒的裂解細菌的方法不同的細菌不一樣的這主要是針對大腸桿菌

5. 溶菌酶溶液怎麼配置,用於細胞的裂解

0.1g溶菌酶溶解到10ml 10mmol/L Tris•Cl(pH8.0),分裝成1ml/小份,保存於-20℃。
溶菌酶(lysozyme)又稱胞壁質酶(muramidase)或N-乙醯胞壁質聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase),是一種能水解致病菌中黏多糖的鹼性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙醯胞壁酸和N-乙醯氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵,使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合,與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽,使病毒失活。因此,該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

6. 請教用溶菌酶裂解細菌的配方

溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白,屬乙醯多糖酶。存在於唾液、乳汁、淚液和鼻及氣管等分泌物中,能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 ),使它能與細菌牢固結合,並水解細菌細胞壁肽聚糖,使細菌裂解死亡。 本實驗在平板上進行唾液…

溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白,屬乙醯多糖酶。存在於唾液、乳汁、淚液和鼻及氣管等分泌物中,能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 ),使它能與細菌牢固結合,並水解細菌細胞壁肽聚糖,使細菌裂解死亡。
本實驗在平板上進行唾液酶的測定。溶菌酶與枯草芽胞桿菌( Bacillus subtilis )作用後,可使該菌因細胞壁破壞而溶解,致使瓊脂板加樣孔周圍出現溶菌環。溶菌環直徑與樣品中溶菌酶含量的對數呈直線關系。
【材料】
1• 無菌 PBS ( pH6.4 , 1/15mol/L ), 5mol/LKOH , 3%PBS 瓊脂,溶菌酶標准品,受驗者唾液。
2• 枯草芽胞桿菌 12 小時培養物。
3• 10×100 試管,試管架,無菌平皿,打孔器,微量加樣器。
4• 分光光度計,水浴箱,溫箱等。
【方法】
1. 菌液配製:將 PBS 加入枯草芽胞桿菌斜面,置室溫 5-10 分鍾後製成菌懸液;在波長 640nm 處,測定菌懸液的濃度,並將菌液濃度調至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶標准液配製:稱取溶菌酶標准品,用 PBS 配成 1000 m g/ml ,置冰箱凍存,臨用時再稀釋成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液標本:待檢測者用清水漱口後,將唾液收集於消毒平皿內待用。
4. 加熱融化 3% 瓊脂,冷至 60 -70℃ ,與預熱好的枯草芽胞桿菌菌懸液等體積混合,到平板。用打孔器在平板上打孔,孔間距約 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 個。
5. 各孔內依次加溶菌酶標准品和唾液樣品,每孔 20 m l 。
6. 置於 24 -26 ℃ 12-18 小時後測量溶菌環直徑。
【結果判斷】
記錄溶菌環的直徑( mm )於下表,繪制標准曲線,並從標准曲線上查出所測樣品的溶菌酶含量。

7. DNA中結合液cb結合了什麼成分

DNA中結合液cb結合了什麼成分
1、不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉澱等步驟.
2、 快速,簡捷,單個樣品操作一般可在20分鍾內完成.
3、多次柱漂洗確保高純度,典型的產量200µl全血可提取出3-6µg,OD260/OD280典型的比值達1.1.9,長度可達30 kb -50kb,可直接用於PCR、Southern-blot和各種酶切反應.
4、從十幾個配方中優選出的紅細胞裂解液配方,裂解快速完全,客戶可根據需要選擇購買.
典型的產量200µl全血可提取出3-6µg 基因組DNA.
5、洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,不影響下游酶切、連接等反應.也可以使用水洗脫,但應該確保批pH大於7.5,pH過低影響洗脫效率.用水洗脫DNA應該保存在-20℃.DNA如果需要長期保存,可以用TE緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影響下游酶切反應,使用時可以適當稀釋.

8. NP40細胞裂解液怎麼配製

組織裂解液配方:`
7M Urea(60. 06) 4.2042 g
2M thiourea(76.12) 1.5224 g
100mM DTT 0.1543 g
4% CHAPS 0.4 g
0.5mM EDTA 0.00146 g
40Mm Tris 0.0485 g
2%(v/v) NP-40 0.2 ml
1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml
5mM PMSF用前加 0.00871 g
2%pharmalyte 0.2ml
共10ml分裝成400µl/每管(可應用於30-80毫克組織裂解)
註:已配好分裝成400µl/每管可供應用
不需另配!!!
細胞裂解液配方:
6M Urea(60. 06) 1.8018 g
2M thiourea(76.12) 0. 7613 g
65mM DTT 0.050 g
4% CHAPS 0.2 g
40Mm Trisbase 0.02425 g
共5ml分裝成200µl/每管(可應用於50-100ml培養瓶內的細胞裂解)

細胞裂解液: 組織裂解液配方:
7 mol/L 尿素、 7M Urea(60. 06) 4.2042 g
2 mol/L硫脲、 2M thiourea(76.12) 1.5224 g
2% NP-40、 2%(v/v) NP-40 0.2 ml
1% Triton X-100、 1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml
65 mmol/L DTT、 0.1003g 100mM DTT 0.1543 g
5 mmol/L PMSF、 5mM PMSF用前加 0.00871 g
4% CHAPS、 4% CHAPS 0.4 g
40 mmol/L Tris、 40Mm Tris 0.0485 g
2% pharmalyte(pH3-10)、2%pharmalyte 0.2ml
0.5mM EDTA 0.00146 g
25 mg/L DNase I、
7 mg/L RNase A、
20 mg/L aprotinin、
20 mg/L leupeptin、
2 mmol/L Na3VO4、
Phosphatase Inhibitor Cocktail 1
Phosphatase Inhibitor Cocktail 2
1ml水化液配方:
8M Urea(60.06) 0.48048 g
2% CHAPS 0.02 g
痕量溴酚蘭 0.4 µl
1%的痕量溴酚蘭(10mg+1000µl雙蒸水)
450µl水化液 加DTT 0.00135mg
or 400µl水化液 加DTT 0.00126mg

9. 磁珠法提取血漿DNA時,裂解液,結合液,洗脫液分別指什麼

裂解液是:鹽酸胍
結合液是:生物磁珠
洗脫液是:蒸餾水