❶ 色譜柱燒壞了會出現什麼情況
塗層被破壞導致保留時間變化,峰的分離度變得不好,以前能分開的峰再也分不開了。 嚴重時也有可能出現不出峰的情況
❷ 色譜柱常見的故障以及日常維護工作有哪些
在我們日常工作中,經常會發現色譜柱出現柱壓過高的現象,這有可能是因為微粒堵塞,細菌生長造成的,也有可能是因為在線過濾器不幹凈,壓力感測器不準確等都會造成柱壓過高的後果,除了柱壓的問題,同時柱效低也是經常使大家苦惱的問題,這有可能是色譜柱被污染、過濾片部分堵塞、色譜柱內的死體積造成的,還有一種在我們工作里經常出現的就是重復性差、不出峰、回收率低,那麼這是什麼原因造成的呢?當梯度實驗時平衡時間不足時,溫度波動,流動相組成改變,樣品溶劑不同,樣品穩定性不好,方法的開發不好,緩沖液的酸鹼度不合適或者緩沖能力不足,為了以後再工作中減少儀器的故障,首先一定要做到儀器的日常維護問題。搜科網總結一下四點:
1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動,首先一定要避免溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下,同時在調節流速時應該緩慢進行。
2、經常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時,對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右,即常規分析需要50~75ml。
3、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱,分析柱是鍵合硅膠時,預柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠「飽和」,避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
4、應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然。
❸ 有機柱色譜實驗中,色譜柱中若留有空氣或填裝不均勻,對分離效果有何影響如何避免
會影響滲透速率和顯色的均勻
避免
1,裝柱過程中應不斷敲打色譜柱。
2,過程中,柱內洗脫劑的液面高度始終不能低於吸附劑最上端。
❹ 色譜柱接反了用有什麼影響高效液相色譜分析中,分析色譜柱接反了用對柱子有什麼影響
如果色譜柱使用時間不長,關系就不大。 但如果是長時間使用過的色譜柱,會導致柱效下降。基線不穩,但沖洗一段時間就好了。 其他的到影響不大。
❺ 柱色譜實驗中,若裝柱時,柱中有氣泡或填裝不均勻,對分離效果有什麼影響
會造成拖尾現象,實際上就是各種物質分離區間互相重疊,分離效果變差。
❻ 液相色譜的柱子接反了對樣品有影響嗎
柱子質量比較好,理論上沒有影響,如果柱子質量不好,可能會導致分離度下降、柱效降低。一般說來色譜柱不能反沖,只有生產者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
一般液相色譜柱是有方向的,通常情況下只能按照其規定流向通過流動相,尤其當色譜柱填充質量不高的時候。
比如實驗室自製色譜柱、使用壓力超高的色譜柱等。這類色譜柱的進口端一般會有一定的凹陷,如果反過來使用,會導致色譜柱填料的塌陷,產生柱效降低等後果。
但是如果制備良好的色譜柱,比如熱電的色譜柱,在進了比較臟的樣品後,可以反沖洗來沖出雜質。
(6)色譜柱配置錯誤會出現什麼情況擴展閱讀
色譜柱的流動相
1、在進行樣品檢測前,至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。流動相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應當天配製以保持新鮮避免細菌產生。
2、流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動相混合後應重新過濾避免溶解度變化造成產生新的沉澱。不應使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱,以免柱性能損壞(添加5%的有機溶劑沖洗色譜柱,同時可以達到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡)。
3、流動相需脫氣後使用,可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時使用的流動相與色譜柱保存使用的流動相有較大區別,應該使用過度分布的形式進行平衡。避免由於流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩沖鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。
❼ 色譜柱的注意事項
色譜柱 的正確使用和維護十分重要,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護色譜柱。
①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料,因此在調節流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩(如前所述)。
②應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然。
③一般說來色譜柱不能反沖,只有生產者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
④選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱,分析柱是鍵合硅膠時,預柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠「飽和」,避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
⑤避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內,需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。
⑥經常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時,對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右,即常規分析需要50~75ml。
下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,作為參考:硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次沖洗,然後再以相反順序依次沖洗,所有溶劑都必須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質,已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗,再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液,那麼可以省略最後用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質,在甲醇(乙腈)沖洗時重復注射100~200μl四氫呋喃數次有助於除去強疏水性雜質。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞碸數次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質污染。
陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗,陰離子交換柱可用稀鹼緩沖液沖洗,除去交換性能強的鹽,然後用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機物)、甲醇、水依次沖洗。
⑦保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發乾燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。
⑧色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進入柱內,使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現塌陷,死體積增大。
在後兩種情況發生時,小心擰開柱接頭,用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內填料整平。然後用適當溶劑濕潤的固定相(與柱內相同)填滿色譜柱,壓平,再擰緊柱接頭。這樣處理後柱效能得到改善,但是很難恢復到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5~30mm),可以起到保護、延長柱壽命的作用。採用保護柱會損失一定的柱效,這是值得的。
通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以硅膠為基質的填料,只能在pH2~9范圍內使用。柱子使用一段時間後,可能有一些吸附作用強的物質保留於柱頂,特別是一些有色物質更易看清被吸著在柱頂的填料上。新的色譜柱在使用一段時間後柱頂填料可能塌陷,使柱效下降,這時也可補加填料使柱效恢復。
每次工作完後,最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當採用鹽緩沖溶液作流動相時,使用完後應用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道,不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經常使用,應每隔4~5天開機沖洗15分鍾。
❽ 3420A氣相色譜儀 色譜柱的故障有哪些
你指的是北分的儀器吧,具體的故障要看你配置的檢測器和什麼色譜柱。
如果你用的是毛細柱,一般柱子沒有什麼問題,如是填充柱要注意填充單體的均勻性和固定相的流失。色譜柱一般都不是儀器商製造的,基本都是代理做的。無論哪種色譜柱,日常需要注意的要不能漏氣和升溫不能超過最高使用溫度。
3420A應該是閥控制流量,每次調節完要注意閥的旋轉位置,建議自己用筆做個記號,閥調好後最好不要動,建議對這些國產的色譜最好單機單用,固定做一個項目,因為國產儀器的閥的故障率是比較高的。
檢測器估計你用的是FID,一般也不宜出故障。注意點火時不要把灰和臟東西弄進去,使用時間長了,注意清洗等等。
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❾ 柱色譜法中裝柱不均勻或者有氣泡、裂縫將會造成什麼後果,為什麼
氣泡或者裂縫會造成譜帶之間的界限傾斜、模糊。尤其是裂縫引起的填料斷層會造成溝流,使得組分之間混合,嚴重影響分離效果。裝柱不均勻會降低柱子的分離效率:填料太鬆散,流動相速度太快,組分沒有在兩相之間充分達到吸附溶解平衡,降低會塔板數,分離不完全;太緊密不僅流動相過柱速度慢,也會造成組分在固定相中擴散,使得譜帶加寬,甚至重疊。
❿ 色譜柱中有空氣或填裝不均勻對分離效果有何影響如何避免
對於氣相色譜和液相色譜分別而言,色譜柱中有空氣對他們的影響不一樣,如果是液相色譜,如果有空氣,會造成基線波動及雜訊,對分析結果有影響,你需要排除空氣。
但對於氣相色譜,有空氣,對分析影響不大。如果色譜柱沒有裝填好,只要空間不是很大,你可以忽略。
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