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如何配置瓊脂糖溶液

發布時間: 2022-08-06 09:05:37

1. 配置1%的瓊脂糖凝膠50ml,稱量瓊脂粉0.5g,5xTBE加多少

一般用TAE吧,你都說是5*,當然就是10mL再加40mL水啊,要是1*的直接加50就行了,小誤差不要太在意。

2. 瓊脂糖凝膠配方

瓊脂糖凝膠是以瓊脂糖為支持介質制備的凝膠。瓊脂糖分為一般瓊脂糖和經化學修飾後熔點降低的低熔點瓊脂 糖,瓊脂糖的熔點在62〜65°C之間,融化後在37°C下可維持液態數小時,30°C時凝固成膠。多用於對染色體DNA在凝膠內進行原位酶切及DNA片段回收。瓊脂糖凝膠 由於孔徑大常用於大分子蛋白質、DNA的分離。[1]

中文名
瓊脂糖凝膠
外文名
Agarose gel
顆粒大小
45-165um
97%的人還看了
聚丙烯醯胺凝膠
瓊脂粉的用法和用途
凝膠電泳
瓊脂糖電泳圖怎麼看
基本內容
瓊脂糖凝膠agarose gel

儲藏溫度:常溫

商品名很多,常見的有,Sepharose(瑞典,pharmacia ),Bio-Gel-A(美國Bio-Rad)等。瓊脂糖凝膠是依靠糖鏈之間的次級鏈如氫鍵來維持網狀結構,網狀結構的疏密依靠瓊脂糖的濃度。一般情況下,它的結構是穩定的,可以在許多條件下使用(如水,pH4-9范圍內的鹽溶液)。瓊脂糖凝膠在40℃以上開始融化,也不能高壓消毒,可用化學滅菌活處理。

瓊脂糖 Agarose,縮寫為AG,是瓊脂中不帶電荷的中性組成成份,也譯為瓊膠素或瓊膠糖。瓊膠糖化學結構由β-D-吡喃半乳糖(1-4)連接3,6-脫水α-L-吡喃半乳糖基單位構成.

把瓊脂糖,即幾乎不含硫酸根的主要成分為多糖的瓊脂,溶於熱水,冷卻製成的凝膠。製成的小顆粒用於凝膠過濾。適於用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾,若使用5%以下濃度的凝膠,也能夠分級分離細胞顆粒、病毒等。利用其吸附性小的特點,有時用它代替瓊脂、以作為免疫電泳或凝膠內沉降反應的支持物。

3. 如何配製2%瓊脂糖溶液

秤一克瓊脂糖,加100毫升蒸餾水。
但是,一般跑電泳的時候,需要加tae緩沖液,50×tae加2毫升,再加98毫升蒸餾水。
配瓊脂糖,差一兩毫升沒什麼影響的,我們實驗室用的是百分之二的。

4. 瓊脂糖凝膠的配製

稱量、溶膠、倒膠、拔梳。
配置步驟如下:
1、稱量,小膠板0.8%的膠需要瓊脂粉0.104gTBE13mL。
2、熔膠,將所稱量的瓊脂粉與TBE在錐形瓶中混合,在微波爐內反復加熱2到3次至瓊脂粉溶解並無氣泡。
3、倒膠,干凈的膠槽內擺好梳子,往膠內滴加1uL左右核酸染料,混勻,待冷卻至不燙手,輕輕倒入膠板內。
4、拔梳待大約2分鍾即可。

5. 瓊脂糖凝膠怎麼配製

把瓊脂糖,即幾乎不含硫酸根的主要成分為多糖的瓊脂,溶於熱水,倒入玻璃杯中,冷卻製成的凝膠。融化後在37°C下可維持液態數小時,30°C時凝固成膠。即完成瓊脂糖凝膠的配置。

製成的小顆粒用於凝膠過濾,適於用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾,若使用5%以下濃度的凝膠,也能夠分級分離細胞顆粒、病毒等。利用其吸附性小的特點,有時用它代替瓊脂、以作為免疫電泳或凝膠內沉降反應的支持物。

(5)如何配置瓊脂糖溶液擴展閱讀:

瓊脂糖分為一般瓊脂糖和經化學修飾後熔點降低的低熔點瓊脂糖,瓊脂糖的熔點在62〜65°C之間,多用於對染色體DNA在凝膠內進行原位酶切及DNA片段回收。瓊脂糖凝膠由於孔徑大常用於大分子蛋白質、DNA的分離。

瓊脂由瓊脂糖和瓊脂果膠兩部分組成:

作為膠凝劑的瓊脂糖是不含硫酸酯的非離子型多糖,是形成凝膠的組分,其大分子鏈鏈節著1,3苷鍵交替相連的β-D-半乳糖殘基和3,6-內醚-L-半乳糖殘基 。而瓊脂果膠是非凝膠部分,是帶有硫酸酯、葡萄糖醛酸和丙酮酸醛的復雜多糖,也是商業提取中力圖去掉的部分。

商品瓊脂一般帶有2%~7%的硫酸酯,0%~3%的丙酮酸醛及1%~3%的甲乙基。在工業上的瓊脂 色澤由白到微黃,具有膠質感,無氣味或有輕微的特徵性氣味,瓊脂不溶於冷水,易溶於沸水。

瓊脂系選用優質天然石花菜、江蘺菜、紫菜等海藻為原料,採用科學方法精煉提純的天然高分子多糖物質。

瓊脂為親水性膠體,分有條狀和粉末狀,不溶於冷水,易溶於熱水。瓊脂在工業上具有獨特的重要性,瓊脂的濃度即使低至1%仍能形成相當穩定的凝膠,是食品工業、化學工業、醫學科研所必需之原料。

6. 低熔點瓊脂糖凝膠怎麼配製

搜索了很久終於找到啦!哈哈!不要太感謝哥哈!1. 瓊脂糖凝膠的制備⑴瓊脂糖凝膠的制備:稱取0.3g瓊脂糖,置於三角瓶中,加入30ml TBE或TAE緩液,置於三角瓶中,加入30ml TBE或TAE緩液,置於三角瓶中,加入30ml TBE或TAE緩液,將該三角瓶置於微波爐加熱至瓊脂糖溶解。將冷卻至65℃左右的瓊脂糖凝膠液,加入溴化乙錠,充分混勻。⑵膠板的制備:①取有機玻璃內槽,洗凈、晾乾;②將有機玻璃內槽置於一水平位置模具上,安好擋板,放好梳子。吸取少量瓊脂糖溶液封固膠膜邊緣,任其凝固,在距離底板0.5~1.0mm的位置上放置梳子,以便加入瓊脂糖後可以形成完好的加樣孔。如果梳子距離玻璃板再近,則拔出梳子時孔底將有破裂的危險,破裂後將使樣品在凝膠與玻璃板之間滲漏。③將剩餘的溫熱瓊脂糖溶液倒入膠膜中,使膠液緩慢地展開,直到在整個有機玻璃板表面形成均勻的膠層。凝膠的厚度在3~5mm之間,檢查一下梳子的齒下或齒間是否有氣泡。 ④室溫下靜置30min左右,待凝固完全後,輕輕拔出梳子,在膠板上即形成相互隔開的上樣孔。制好膠後將鋪膠的有機玻璃內槽放在含有0.5~1×TAE(Tris-乙酸) 或TBE(Tris-硼酸)工作液的電泳槽中使用,沒過膠面1mm以上。(註:溴化乙錠是一種強烈的誘變劑並有中度毒性。使用含有該染料的溶液時必須戴手套。使用完後應該進行凈化處理。通常用水配製成10mg/ml的貯存液在室溫下避光儲存,使用終濃度為0.5μg/ml。)

7. 配置瓊脂糖膠時,可以用蒸餾水和高濃度的TAE液嗎

1.用蒸餾水將制膠工具洗干凈 准備好制膠平板 用瓊脂將模具邊緣封閉 架好梳子
2.根據要分離的樣品(DNA)大小配製合適濃度的瓊脂凝膠 准確的稱取一定量的瓊脂糖乾粉 加入到合適體積的錐形瓶中 加入一定量的電泳緩沖液(30ml左右TAE) 放入到微波爐內加熱融化 冷卻片刻(不燙手即可)
3.融化後的瓊脂溶液搖晃混勻 倒入電泳槽中 等其凝固
4.室溫下凝固30-40min左右 小心的拔出梳子 取出凝固好的凝膠放入電泳槽內 准備上樣
5.在電泳槽中倒入電泳緩沖液(TAE)沒過膠面1mm左右 去除膠孔內的氣泡
6.上樣 5ulDNA樣品加入1ul上樣緩沖液(loading buffer)和1ul的染料 用搶混勻後加入到凝膠孔內
.上樣結束 接通電源 紅色正極 黑色負極 DNA樣品有負極往正極運動 加樣孔側為負 40-50v電壓 電壓30敏左右即可(< 40min)
8.電壓結束 關閉電源 凝膠成像儀上觀察電壓位置並比對marker判斷大小

8. 瓊脂糖凝膠是用什麼液體配置的

主要的原因是保持瓊脂凝膠和周圍的緩沖體系保持相同的pH值,當然這種pH值是前人優化過的,最有利於核酸分離和穩定的pH條件;如果凝膠和緩沖體系的pH存在較大的差異,勢必會影響核酸的分離效果。

9. 我想問跑瓊脂糖電泳時,loading buffer 的配方

一般瓊脂糖凝膠loading buffer 配成10倍貯存液,如下:
20%(w/v) Ficoll 400
0.1mol/L Na2EDTA,PH8.0
1.0%(w/v)SDS
0.25%(w/v)溴酚蘭
0.25%(w/v)二甲苯青

注意溶液為電泳緩沖液,用時加入上樣體積的十分之一就行了
另外,買DNA marker 時一般都會附送loading buffer